Руководства, Инструкции, Бланки

инструкция по сапу лошадей

Рейтинг: 4.3/5.0 (453 проголосовавших)

Категория: Инструкции

Описание

Болезни лошадей

/ Частная эпизоотология / Болезни лошадей

Сап (Malleus) – бактериальная, преимущественно хроническая болезнь, характеризующаяся образованием специфических сапных узелков. Склонных к некрозу, и проявляющаяся язвенным ринитом и лимфаденитом, гнойно-некротическими поражениями кожи.

Историческая справка — давно известная болезнь, впервые описанная Гиппократом (V в. до н. э.) и Аристотелем (V в. до н, э.), назвавшими ее «дур­ной» болезнью (греч.malis— дурной, злой). Хотя заразный характер сапа был под­мечен давно, но истинное признание этого свойства наступило только в XVII—XVIII вв.Lerloch(I869) иBollinger(1878) доказали передачу болезни через прямой и не­прямой контакты,LefflerиSchutz(1891) получили чистую культуру возбудителя и экспериментально воспроизвели болезнь. В последующие годы велось всестороннее изучение сапа, и изыскивались специфические средства диагностики. Русским ветв­рачам Х. Гельману и О. Кальнинку в 1891 г. удалось получить маллеин для аллер­гической диагностики, а немецкому ученомуSchutz(1907) разработать РСК.

В прошлом, особенно в период мировых войн, сап имел широкое распростране­ние во многих странах мира (в первую мировую войну в России 20% лошадей были поражены сапом). В настоящее время неблагополучными считаются лишь некоторые страны Ближнего (Иран, Ирак, Сирия, Турция, Пакистан) и Дальнего (Индонезия, Монголия, Китай и др.) Востока. У нас сап ликвидирован в 1940 г.

Возбудитель —pseudomonasmallei— неподвижная, грамотрицательная, необразующая спор и капсул бактерия величиной 0,3—0,8х1—5 мкм. Бактерии отно­сительно плохо воспринимают анилиновые красители, поэтому для окрашивания пользуются метиленовой синью (по Леффлеру) или карболовым фуксином. В маз­ках из пораженных тканей чаще располагаются парами, цепочками м снопообраз­ными скоплениями.

Хорошо растет на обычных питательных средах с добавлением 1—3% глицерина или 0,1 % дефибринированной крови лошади. На МПБ вызывает помутнение среды, пристеночное кольцо и слизистую пленку; на агаре — через 2—3 сут. вырастают гладкие полупрозрачные колонии с перламутровым оттенком (на кровяном — мел­кие, коричневые, медоподобные); на глицериновом картофеле — на 2-й день мел­кие, прозрачные, похожие на капли меда колонии, впоследствии сливающиеся (сплошной медообразный налет). В молодых культурах бактерии стройные и длин­ные, в старых — полиморфные, от коккообразных форм до длинных нитей с булавовидно утолщенными концами (подобие актинобацилл). У Р. malleiвесьма широкий спектр патогенности. Из лабораторных животных наиболее чувствительны кошки, морские свинки и золотистые хомячки, которых и используют в биологической пробе. В организме пораженных животных индуцирует синтез агглютининов и комплементсвязывающих антител, а также выраженную гиперчувствительность замедленного типа.

Устойчивость — во внешней среде слабая. Солнечный свет убивает в течение 24 ч, высушивание—через 7—21 день, нагревание до 55. С— 10 мин, 80 ?С — 5 мин. В гниющих материалах, воде, в сырых помещениях сохраняется до 15—30 дней. Р.malleiчувствительна к стрептомицину, тетрациклинам и их комби­нациям с сульфаниламидами. Дезсредства в общепринятых концентрациях убивают возбудителя, а течение нескольких минут.

Эпизоотологические данные. В естественных условиях сапом обычно болеют однокопытные: лошади, ослы, мулы, лошаки. Наи­более чувствительны ослы и мулы, и болезнь у них протекает ост­ро. Лошади сравнительно менее чувствительны и переболевают преимущественно хронически. Весьма восприимчивы хищники из семейства кошачьих (львы, тигры, пантеры, рыси и др.), бурые и белые медведи при поедании контаминированного возбудителем мяса (летальный исход). Сравнительно редко заболевают верблю­ды. Болеет сапом и человек.

Источники, возбудителя инфекции — клинически и бессимптомно больные животные, выделяющие Р. malleiпреимущественно с носовыми истечениями, с мокротой при кашле и гноем кожных язв, а при заглатывании мокроты — и с калом. Инфицированные экс­креты контаминируют корма и воду, через которые и происходит заражение (алиментарный путь). При кожном сапе возможен кон­тактный путь заражения через поврежденную кожу — прямо и кос­венно (сбруя, инвентарь, подстилка и т. п.), а также при случке. При легочной и носовой формах сапа возбудитель передается воз­душным путем (с аэрозолью мокроты при кашле, обнюхивании, облизывании и т. д.). В табунном коневодстве преобладает воздушно-пылевой путь передачи возбудителя сапа.

Между хозяйствами и табунами сап обычно распространяется с клинически и латентно больными лошадьми. Инфицированные жи­вотные месяцами могут иметь хорошую упитанность и, оставаясь своевременно не выявленными и изолированными, перезаражают здоровых лошадей.

Сап среди лошадей распространяется сравнительно медленно. При хроническом и латентном течении болезни выделение возбу­дителя и инфицирование объектов внешней среды незначительны и непостоянны. Но при тесном размещении лошадей в сырых, плохо вентилируемых помещениях, бесхозяйственности, беспорядочном использовании станков без предварительной дезинфекции болезнь может за короткое время быстро и широко распространиться и ох­ватить значительную часть поголовья животных. Особенно благо­приятные условия для перезаражения, если пользуются общими кормушками, водопойными корытами, ведрами, торбами, при бес­контрольном перемещении (перевозках) животных, а также при пастбищном табунном содержании лошадей.

В стационарно неблагополучных по сапу хозяйствах (странах) среди пораженных животных преобладает латентное течение болез­ни, при котором отсутствуют не только клинические признаки, но иногда временно выпадает и реакция на маллеин (ГЧЗТ). Особенно это относится к полудиким животным. Резкое изменение условий содержания, бескормица, усиленная эксплуатация, перевоз живо­тных в другие природно-климатические условия (акклиматизация) обычно у таких лошадей вызывают обострение скрытого сапного процесса, вплоть до явной инфекции.

Патогенез. Попав в организм любым путем, возбудитель сапа вначале оседает и размножается в регионарных лимфоузлах. В от­дельных странах благодаря выраженным защитным силам организ­ма микробы могут затем погибнуть, вызвав лишь аллергическое со­стояние, выявляемое маллеином. Но чаще из регионарного лимфо­узла Р.malleiпроникает в кровь, вызывает кратковременную бак­териемию и лихорадку. С кровью возбудитель заносится в различ­ные ткани и органы, где размножаются, вызывая сапные узелки и язвы.

Формирование сапного узелка (гранулема) начинается с гипере­мии пораженного участка и пропитывания ткани серозно-фибринозным экссудатом. Затем в центре такого участка скапливаются микро- и макрофаги, появляются гигантские клетки; по перифе­рии — лимфоидные и плазмоцитарные клетки, замещающиеся впоследствии фибробластами. Клетки центральной зоны сапной гранулемы в результате экзо- и эндотоксинов возбудителя вскоре гибнут и подвергаются казеозному распаду. При благоприятном ис­ходе гранулема инкапсулируется и обызвествляется. В результате у животных с высокой естественной устойчивостью сапной процесс протекает хронически, а при латентной форме сапа болезнь даже может иногда заканчиваться полным выздоровлением.

У животных с пониженной резистентностью инкапсулирование сапных узелков замедляется, вокруг них развивается инфильтрация с множеством новых сапных гранулем (миллиарный сап). Такой процесс в легких приводит к выраженной пневмонии, образованию каверн; в носовой полости — к прогрессивному дифтеритическому воспалению и обширному язвенному поражению слизистой и даже хрящевой ткани; в коже — к появлению множества мелких узелков и гноящихся язв. Легкие при сапе поражаются в 84—100%, носо­вая полость — в 56—95 и кожа — до 13% случаев.

Общее состояние зависит от интенсивности сапного процесса, клинической формы болезни, количества попадающего в кровь эк­зо- и эндотоксинов возбудителя (факторы вирулентности) и про­дуктов распада тканей организма. При хроническом течении сапа, которое отмечается у 87% пораженных лошадей (С. Н. Вышелесский), периодически наступают рецидивы лихорадки, совпадающие с развитием новых сапных узелков. Но ремиссии могут продол­жаться многие месяцы, и при полноценном кормлении, умеренной эксплуатации латентно больные сапом лошади могут длительно оставаться в рабочем состоянии. Такие лошади закономерно проявля­ют ГЧЗТ, которую выявляют аллергическим исследованием.

Течение и симптомы. После заражения » в начале заболевания сапной процесс клинически не проявляется, и его можно выявить лишь аллергическим исследованием — маллеинизацией. Обычно положительная реакция на маллеин появляется через 2—3 недели после заражения. Этот срок и считается инкубационным периодом болезни. Видимые клинические признаки сапа появляются спустя 4 недели и даже значительно позже после естественного заражения. Болезнь может протекать остро и хронически в легочной носовой и кожной формах, а также латентно.

При остром течении отмечают общие нехарактерные сим­птомы: лихорадку (41—42 ?С), угнетение, анорексию, дрожание мышц, слабый пульс, частое и прерывистое дыхание. Хотя в таких случаях постоянно поражаются легкие, кашель, влажные хрипы, усиленное везикулярное дыхание регистрируют редко.

Наиболее характерные клинические признаки болезни при носо­вой и кожных формах сапа проявляются обычно спустя некоторое время после общих симптомов. При поражении носовой полости вначале возникают красные пятнышки, переходящие через 2—3 дня в мелкие желтоватые узелки (дифтеритичсское воспаление) со склонностью к быстрому некротическому распаду; на их месте об­разуются круглые или овальные язвы. Сопровождается это выделением слизисто-гнойного экссудата, иногда с примесью крови. Язвы становятся кратерообразными с неровными подрытыми краями, Они могут сливаться, образуя обширные изъязвления слизистой вплоть до распада носовых раковин и перегородки. Такому процес­су соответствует обильное истечение из одной или обеих ноздрей и сопящее дыхание.

При гнойно-некротическом рините закономерно поражаются регионарные лимфоузлы. Сперва они болезненны, увеличены и горя­чие, а затем становятся плотными, неподвижными и безболезнен­ными. Если острый процесс затягивается, носовые язвы могут за­живать и на их месте образуются звездчатые рубцы,

Поражения при кожной форме сапа чаще локализуются на голо­ве, шее, конечностях и препуции. Вначале на коже появляются отечные болезненные припухлости, после рассасывания, которых возникают плотные узлы с последующим их распадом и образова­нием гноящихся язв с изрытыми неровными краями. Развивается подкожный лимфаденит с четкообразными утолщениями по ходу воспаления сосудов. Вскоре наступает их размягчение и вскрытие.

Легочная форма развивается сравнительно медленно. Ей предшествуют слабовыраженные общие симптомы, свойственные острому течению, затем в симптомокомплексе начинают доминиро­вать клинические признаки легочного сапа: быстрая утомляемость, постепенное исхудание, слабый кашель со слизисто-гнойными и кровянистыми хлопьями мокроты. При развитии пневмонии и по­явлении каверн—притупленный перкуторный звук; усиленное везикулярное, иногда бронхиальное дыхание, влажные хрипы. Неточ­ный сап может клинически и не проявляться, а протекать скрыто. Легочная, носовая и кожная формы — это лишь клиническое орган­ное проявление общего сапного процесса. Чаще острое течение бо­лезни наблюдают 'у ослов и мулов и реже — у лошадей. Длится она 8—30 дней и обычно заканчивается смертью или принимает хрони­ческое течение.

Хронический сап протекает месяцами и даже годами, проявляясь настолько незначительными клиническими симптома­ми, что они долгое время остаются незамеченными. У больных жи­вотных может быть редкий сухой кашель, ремитирующая или интермиттирующая лихорадка, иногда эмфизема легких. На слизи­стой носа находят звездчатые рубцы, увеличены, плотные и безболезненные лимфоузлы, изредка сло­новость тазовых конечностей. Периодически отмечают рецидивы болезни.

Латентный сап продолжается многие годы без проявления клинических признаков. Выявляют его только аллергическим исс­ледованием- В настоящее время латентное течение регистрируют у большинства пораженных сапом животных в стационарно неблаго­получных пунктах тех стран, где болезнь продолжает оставаться эпизоотологически значимой проблемой.

Хищные животные болеют острым сапом. У заболевших появля­ется хромота, затем слизисто-гнойный ринит и изъязвление кожи спинки носа, конечностей и хвоста. Развиваются общая слабость, септицемия, диарея, животные погибают спустя 1—2 недели после заражения.

Патологоанатомические изменения. Зависят от течения и формы сапа. При носовой и кожной формах поражения ана­логичны тем, которые регистрируют еще при жизни животного. Сапные узелки и язвы обнаруживают на слизистой гортани и тра­хеи. Чаще поражены легкие и лимфоузлы, реже — селезенка, пе­чень и почки, где находят сапные гранулемы, сходные по структуре с туберкулезными (стекловидные, просвечивающиеся, окруженные пояском гиперемии, или инкапсулированные и обызвествленные). При легкой форме возможен узелковыйcanили же сапная пневмо­ния. Лобулярнам пневмония имеет вид красной гепатизации с цент­ром казеозного распада. Встречается гнойное расплавление ткани легкого и наличие абсцессов и каверн. При хроническом течении отмечают разращение фиброзной ткани с мелкими гнойничками и обызвествленными очагами. При постановке прижизненного диаг­ноза трупы вскрывать не рекомендуется.

Диагноз. Если клинические признаки болезни характерные, вы­ражены четко, диагноз на сап можно поставить на основании ре­зультатов клинико-эпизоотологичсского и патологоанатомического исследования. Но так какcanчасто протекает хронически или ла­тентно, обязательны аллергические и серологические исследования. Для аллергической диагностики применяют маллеиновую пробу (глазную, подкожную и внутрикожную).

Глазная маллеинизация считается основным ме­тодом диагностики сапа у лошадей, ослов, мулов и верблю­дов. Маллеин вводят двукратно с промежутком 5—б дней. Ис­следование проводят утром, нанося маллеин стерильной пипет­кой на конъюнктиву здорового глаза при оттянутом нижнем веке в количестве 3—4 капель. Реакцию учитывают после первого введения препарата через 3, 6, 9 и 24 ч. Реакцию признают положительной при развитии гнойного конъюнктиви­та. Наряду с этим у некоторых лошадей наблю­дают серозно-гнойное истечение из ноздри. Иногда реагирует и другой глаз. При сомнительной реакции наблюдают гипере­мию конъюнктивы, припухание век, слезотечение и незначи­тельное скопление (капля) гноя в углу глаза; при отсутст­вии реакции иногда впервые 2—3 ч отмечают лишь слабую гиперемию и небольшое слезотечение. Животным с сомнитель­ной и отрицательной реакцией маллеин вводят повторно через 5—6 дней в тот же глаз, реакцию учитывают через 3, б, 9 и 12 ч, В период исследования животных держат на короткой привязи или в конюшне привязанными врастяжку, головой к проходу. Верблюдам глазную маллеинизацию проводят одно­кратно.

Данной пробой выявляют более 95% пораженных сапом живот­ных. У истощенных и ослабленных лошадей, а также с сильно прогрессирующим сапным процессом чувствительность к маллеину понижена.

Подкожную маллеинизацию осуществляют в том слу­чае, если нельзя применить офтальмопробу (болезни глаз), а также при неясных показаниях глазной пробы. У лошадей предварительно измеряют температуру тела (утром, днем, вечером). Средняя температура не должна превышать 38,5 С. Маллеин вводят подкожно в дозе 1 мл в области шеи. Температуру тела начи­нают измерять на другой день в 6 ч утра и продолжают через каж­дые 2 ч до 18-го ч, затем на 24-м и 36-м ч. Оценивают реакцию по показаниям температуры тела и интенсивности развития местной реакции.

Реакцию признают положительной, если температура тела под­нимается до 40 °С и в течение б—8 ч удерживается на этом уров­не, а затем постепенно снижается до нормы. На месте введения маллеина имеется местная реакция (может быть и незначитель­ная). Положительный результат считают также и в том случае, ес­ли на месте введения препарата развивается сильно выраженная горячая, болезненная припухлость и температура тела поднимается выше 39,6 °С. При сомнительном результате местная реак­ция выражена слабо, температура тела поднимается выше 39 °С, но не выше 39,6 °С; при подъеме температуры выше 40 °С местная реакция может и отсутствовать. Проба считается отрицательной, если на месте введения маллеина воспалительная припухлость не образуется или возникает незначительная местная реакция, темпе­ратура тела остается в пределах нормы или повышается до 39 °С. Подкожной пробой выявляют до 95% больных сапом животных, но по технике выполнения она довольно трудоемкая.

Внутрикожный метод применим для полудиких табун­ных лошадей, так как другими методами исследовать их очень трудна. Маллеин вводят внутрикожно в области шеи в дозе 0,2 мл, реакцию учитывают через 48 ч. При положительной реакции на месте введения маллеина развивается строго очерченная тестоватой консистенции, горячая, болезненная припухлость величиной 2х3,5 см или 14,5х25 см. Отобранных на экспорт лошадей исследуют дважды. Нереагирующим лошадям второй раз маллеин вводят через 48 ч, реакцию учитывают через 24 ч. Этот метод по диагно­стической ценности не уступает глазному.

Исследование сыворотки крови в РСК проводят только у лошадей, положительно реагирующих на маллеин. Данный метод позволяет выделить животных с активным сапным про­цессом. Положительные показания только одной РСК при отрица­тельной реакции на маллеин не служат основанием для диагноза на сап.

В некоторых случаях прибегают к бактериологическому и гисто­логическому исследованиям, а также к биопробе на кошках или морских свинках.

Дифференциальный диагноз. Исключают мыт, эпизоотический лимфангит, мелиоидоз, язвы туберкулезного и травматического происхождения, риниты различной природы. При этих заболевани­ях получают отрицательные результаты маллеинизации и лабора­торных исследований на сап.

Лечение. Больных сапом животных лечить запрещено, их уничтожают.

Иммунитет. При сапе иммунитет нестерильный, выражен слабо и только за счет клеточных факторов защиты. Фагоцитоз микробов микро- и макрофагами незавершенный, гуморальные- факторы, включая специфические агглютинины и комплементсвязывающие антитела, не играют существенной роли. Сопротивляемость орга­низма лошади зависит от выраженности естественной резистентности, способности копировать возбудителя в сапных гранулемах с последующим их обызвествлением. У зараженных животных разви­вается состояние инфекционной аллергии. В зонах Стационарного неблагополучия, в особенности среди табунных аборигенных лоша­дей, отмечают значительную устойчивость к заражению. Средств для специфической профилактики сапа нет.

Профилактика и меры борьбы. Система противосапных мероп­риятий основывается на предупреждении заноса сапа из государств, неблагополучных по этой болезни, а также на систематическом плановом контроле за благополучием хозяйств внутри страны. Все поголовье однокопытных не менее одного раза в год подвергают клиническому осмотру на сап и маллеинизации.

Кроме того, лошадей, мулов, ослов и верблюдов до передачи другим хозяйствам, отправки на выставки, спортивные состязания, перевозки всеми видами транспорта и до убоя на мясо обязательно клинически исследуют на сап и проводят маллеинизацию. Вновь поступивших в хозяйство животных содержат в профилактическом карантине (клинический осмотр и маллеинизация). Особое внима­ние обращают на состояние кожных покровов, видимых слизистых оболочек и лимфоузлы.

При подозрении на заболевание сапом рекомендуют комплекс­ное диагностическое исследование (клинико-эпизоотологическое, патологоанатомическое, аллергическое, серологическое и бактерио­логическое). При подтверждении диагноза хозяйство (табун) объяв­ляют неблагополучным по сапу и накладывают карантин. Явно больных лошадей, а также не имеющих клинических признаков са­па, но дающих положительный или сомнительный результат глаз­ной маллеинизации уничтожают вместе с кожей. Подозреваемых в заражении сапом (здоровые лошади, ослы, Мулы) неблагополучной фермы клинически исследуют через каждые 5 дней и глазной мал­леинизацией — через каждые 15 дней до объявления хозяйства благополучным по сапу (получение трехкратных отрицательных результатов по группе). Конюшни и территорию вокруг них очища­ют и подвергают текущей дезинфекции через каждые 15 дней, ис­пользуя 3 %-ный горячий раствор едкого натра, 23 %-ный формальдегид, 20 %-ную взвесь свежегашеной извести, 10—20 %-ную хлорную известь, содержащую не менее 3 "/о активного хлора, 5 %-ный раствор лизола. Предметы ухода и упряжь дезинфициру­ют 5 %-ным креолином. Навоз, подстилку и остатки корма из по­мещений, где были выявлены бальные животные, сжигают. Навоз от животных, подозрительных в заражении, обезвреживают биотермически в течение 2 мес.

В последние годы при подтверждении диагноза на сап планиру­ется уничтожение всей неблагополучной группы (табуна), где вы­явлены больные животные. Хозяйство объявляют благополучным и снимают карантин спустя 45 дней после последнего случая выявле­ния и убоя больного животного и проведения заключительной дез­инфекции.

Эпизоотический лимфангит (Lymphangitisepizootica, африкан­скийcaп, бластомикоз) — хронически протекающая инфекционная болезнь преимущественно однокопытных, вызываемая почкующим­ся грибомHistoplasmafarciminosum, характеризующаяся гнойным воспалением кожных и подкожных лимфатических сосудов, регионарных лимфоузлов с образованием гранулематозных фокусов и язв.

Историческая справка. Впервые болезнь наблюдали в XIV в. во французских и итальянских колониях Африки. Из-за схожести клинической картины, особенно в начальной стадии, ее смешивали с сапом. Лишь в 1873 г. итальянский ученыйRivoltaобнаружил в гное из язв у лошадей возбудителя, назвав егоCryptococcusfarciminosum,a10 лет спустя (1883) совместно сMicelloneвыделил чистую культуру возбудителя. Тогда же на основе накопившегося большого количества клинического материала был поставлен вопрос о необходимости отличать настоящий сан от эпизо­отического лимфангита (африканского сапа). В России в 1897 г. подробно описал болезнь и методы ее дифференциации от сапа М. Г. Тартаковский. Эпизоотический лимфангит зарегистрирован в раде стран Европы, Азии, Африки и Америки. В СССР ликвидирован в 1960 г.

Возбудитель — дрожжевидный грибHistoplasmafarciminosum (Cryptococcusfarciminosus) — встречается в гное абсцессов в криптококковой, а на питательных средах (во внешней среде) — в мицелиальной формах.

Криптококки в неокрашенных препаратах имеют вид овальных, яйцевидных клеток величиной 3,7—4,0х2,4—3.6 мкм с заостренным концом и двухконтурной оболочкой. Цитоплазма имеет 1—4 сильно преломляющих свет зернышка, которые в живой клетке обладают подвижностью, Гистоплазмы постоянно обнаруживают в размягченных кожных узлах, в гное только что вскрывшихся абсцессов, лимфатиче­ских сосудов и узлов, в гранулемах на слизистых оболочках носа. Они обычно рас­полагаются внутри лейкоцитов (нейтрофилов, макрофагов), реже (в старых фоку­сах) — вне клетки. Возбудитель размножается в гное путем почкования: на заост­ренном полюсе криптококка выходит плазма; образуется бутон, на поверхности ко­торого появляется новая двухконтурная мембрана. Вскоре после этого отделяется са­мостоятельная дочерняя клетка.

Криптококки грамположительны, окрашиваются всеми анилиновыми краска­ми, но лучше по Паппенгейму, Романовскому—Гимзе, Новикову или по Стерку.

Для культивирования гистоплазм рекомендованы различные питательные среды: МПА, МППА с 2% глюкозы и 2.5% глицерина (рН 7,4—7,6), агар Сабуро с добав­лением измельченных тканей лимфатических узлов или зобной железы лошадей, сывороточные, яичные и др. Рост на этих средах обнаруживают через 2—4 недели в виде коричнево-желтых точечных колоний, которые медленно растут и превращаются в сухие наложения. В мазке из культуры начадят сегментированные мицелиальные нити, которые ветвятся и обрадуют на концах или посредине округлые двухкон­турные хламидоспоры величиной 8—10 мкм. Для получения криптококков грибы выращивают на кровяном агаре при температуре 37 С в атмосфере 15—30% СО2 .

Устойчивость — гистоплазмы в мицелиальной форме выживают в почве, навозе, а также в замороженной культуре до 3 мес. В гное из язв криптококки со­храняют вирулентность в стойлах 6 мес. прямой солнечный свет убивает их через 5 дней, а нагревание до 80 ?С — через несколько минут. Взвесь хлорной извести, со­держащая 1% активного хлора, убивает возбудителя через 2 мин. растворы креоли­на (3 %-ный) — через 5 мин, едкого натра (3 %-ный) — через 25 мин, фенола, ли­зоформа и формальдегида (1 %-ные) — через час. Газообразный серный диоксид в концентрации 18 об% уничтожает культуру за 5 мин.

Эпизоотологические данные. В естественных условиях эпизоо­тическим лимфангитом чаще болеют лошади, мулы, лошаки, ре­же — ослы. Описаны случаи заболевания крупного рогатого скота и верблюдов. У кроликов и морских свинок после подкожной инъек­ции гноя формируются только местные абсцессы; отмечают, кроме того, опухание губ и лимфоузлов коленной складки. Эксперимен­тальное заражение однокопытных в кожу или под кожу свежеполу­ченным гноем в большинстве случаев остается безрезультатным. Образующиеся узелки, внутри которых находятся гной и гистоплазмы, быстро рассасываются, не приводя к характерному воспале­нию лимфатических сосудов. Болезнь с характерными клинически­ми признаками удавалось воспроизвести путем повторной (не позд­нее 50 дней после первой) инъекции культуры возбудителя, содер­жащей споры. Лошади восприимчивы независимо от возраста. Же­ребята до 6-месячного возраста сравнительно устойчивее, но годо­валые болеют чаще, чем взрослые.

Источник возбудителя болезни—больные животные, выделяю­щие во внешнюю среду криптококков с гноем вскрывшихся абсцес­сов и язв.

Возбудитель лимфангита проникает в организм здорового живо­тного через поверхностные или глубокие кожные раны при непос­редственном соприкосновении его с больными или при участии раз­личных факторов передачи: предметов конского снаряжения (скребницы, щетки, попоны и др.), нестерильных хирургических инструментов, подстилки, навоза, почвы, кормов, одежды обслужи­вающего персонала, загрязненных выделениями больных живо­тных. Передача возбудителя возможна также воздушным, алиментарным (жеребятам от подсосных кобыл) и половым (при случке) путями. Механическими переносчиками могут быть кровососущие насекомые и грызуны.

Возникнув в хозяйстве, болезнь проявляется в виде спорадиче­ских случаев или небольших эпизоотических вспышек, распростра­няется медленно, приобретает стационарный характер с выражен­ным подъемом заболеваемости осенью и зимой. Возникновению и распространению эпизоотического лимфангита способствуют непол­ноценное кормление, плохой уход за животными, усиленная экс­плуатация и массовый травматизм лошадей, а также неблагоприят­ные погодные условия. Летальность 10—15%.

инструкция по сапу лошадей:

  • скачать
  • скачать
  • Другие статьи

    Форум ветеринария крс - Просмотр темы - Исследования на сап

    кажется с 3х месячного возраста. вот инструкция, но возраста нет

    МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
    (Минсельхозпрод России)

    УТВЕРЖДАЮ Заместитель руководителя Департамента ветеринарии В.В.Селиверстов

    № 13-7-2/537 от 26 февраля 1996 г.

    Наставление по диагностике сапа

    1.1.При клиническом осмотре обращают внимание на состояние кожного покрова, поверхностных лимфатических узлов и сосудов, слизистой оболочки носовой полости, общее состояние здоровья животного.
    По внешнему проявлению болезни различают сап носовой, кожный и легочный. Иногда все три клинические формы могут быть выражены одновременно.
    1.1.1.при носовом сапе на слизистой оболочке носовой полости появляются мелкие желтоватые узелки, окруженные красным ободком. На их месте образуются характерные язвы и звездчатые рубцы.
    Развитие язв сопровождается гнойным истечением из носа, иногда с примесью крови, а также припуханием подчелюстных лимфатических узлов.
    1.1.2.при сапных поверхностных поражениях кожи наблюдают пустулу, язву с гнойным содержанием или заполненную грануляционнной тканью, или рубец.
    При глубоких поражениях в толще кожи обнаруживают плотные узлы с гнойно-
    некротическим содержанием на разрезе, язвы или рубцы, которые могут быть расположены по ходу лимфатических сосудов.
    1.1.3.При поражении легких наблюдается слабый глухой кашель, быстрая утомляемость животного, периодические подъемы температуры тела выше 38,5 гр.С.

    Для аллергического исследования на сап применяют маллеин, представляющий собой стерильный культуральный фильтрат возбудителя сапа, выращенного на жидкой питательной среде.
    При диагностике болезни применяют двукратную глазную и подкожную маллеиновые
    пробы.
    2.1.глазная маллеиновая проба.
    2.1.1.Перед проведением исследования лошади (ослы, мулы) должны быть в течение суток освобождены от физической нагрузки и содержаться на привязи. Обследование животных, имеющих конъюнктивиты и другие заболевания глаз, глазной пробой не проводят.
    Обследуемым животным наносят 3-4 капли маллеина с помощью глазной пипетки на конъюнктиву одного глаза при оттянутом нижнем веке.
    Реакцию учитывают через 3,6,9,12, и 24 часа путем осмотра слизистой оболочки глаза.
    Положительная реакция характеризуется длительной или кратковременной гиперемией и опуханием конъюнктивы разной степени с гнойным истечением из внутреннего угла глаза, или скоплением гноя в конъюнктивальном мешке.

    Реакцию считают отрицательной при отсутствии каких-либо изменений, или при слабом покраснении конъюнктивы и слезотечении.
    2.1.2.Животным, не реагировавшим на первую аппликацию аллергена, препарат через 5-6 сут. наносят повторно в той же дозе на конъюнктиву того же глаза.
    Реакцию учитывают, как указано в п. 2.1.1.
    2.2. Подкожная маллеиновая проба.
    2.2.1. Подкожную маллеиновую пробу применяют не ранее 1,5 мес. после предыдущей подкожной пробы. Перед ее проведением животных выдерживают на привязи не менее суток и поят подогретой водой.
    2.2.2. У лошадей (ослов, мулов) измеряют температуру тела в 7-8, 14-15 и 21-22 ч.
    Обследование животных с кратковременным или длительным повышением температуры до 39 гр.С и выше подкожной маллеиновой пробой не проводят.
    2.2.3.Маллеин животным вводят подкожно в области подгрудка в количестве 1 куб.см.
    Общую температурную реакцию тела и местную реакцию в области введения аллергена учитывают через 6-8, 10-12, 14-16, 20-24 и 30-36 ч.
    Положительная реакция характеризуется постепенным подъемом температуры до 39,6 гр.С и выше и медленным ее спадом с возможным слабым вторичным подъемом через 30-36 часов, а также образованием в месте введения маллеина воспалительной припухлости разной степени выраженности.
    Реакцию считают отрицательной при нормальной температуре тела или кратковременном подъеме ее не более 39,5 гр.С и отсутствии изменений в месте введения маллеина.

    3.1.Пластинчатая реакция агглютинации с сапным цветным антигеном (РА).
    3.1.1.компоненты реакции.
    3.1.1.1.Антиген сапной цветной для пластинчатой РА представляет собой гомогенную взвесь в буферном растворе инактивированной окрашенной культуры возбудителя сапа. При хранении допускается образование осадка, переходящего в гомогенную взвесь при встряхивании. Перед употреблении флакон с антигеном выдерживают в течение 15-20 мин. при температуре (18-30)гр.С и встряхивают.
    3.1.1.2. испытуемая сыворотка крови лошадей, нативная или консервированная.
    Консервирование сыворотки крови проводят кристаллами борной кислоты (2-4% к объеу сыворотки) до получения насыщенного раствора или путем однократного замораживания.
    Не консервированная сыворотка крови пригодна для исследования в течение 5 суток со дня взятия крови с сохранением ее при температуре (4-8)гр.С.
    Сыворотка, консервированная борной кислотой, пригодна для исследования в течение 10 суток, замороженная сыворотка - в течение 3 суток после однократного оттаивания.
    Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки крови исследованию на сап не подлежат.
    3.1.1.3. Сыворотка сапная для РА и РСК (позитивная сыворотка), изготавливается на биопредприятии.
    3.1.1.4. Сыворотка крови лошадей неспецифическая не консервированная (неготивная сыворотка), изготавливается на биопредприятии.
    3.1.1.5.Физиологический раствор -0,85%-ный раствор хлорида натрия рН 6,8-7,2.
    Коррекцию рН проводят 10%-ным раствором соляной кислоты или 10%-ным раствором гидроокиси натрия.
    3.1.2.Постановка РА.
    Реакцию проводят на чистых сухих металлических эмалированных пластинках с лунками при температуре (18-30)гр.С. На бортиках пластинки против каждой лунки записывают номер исследуемой сапной крови.
    В начале работы ставят контроль антигена с позитивный сапной сывороткой и с негативной сывороткой крови лошадей, а также контроль антигена на спонтанную агглютинацию (к 0,03 куб.см антигена добавляют 0,03 куб.см сыворотки или физиологического раствора).
    Исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 куб.см вносят на дно лунки при помощи шприца-полуавтомата или микропипетки.
    После внесения каждой сыворотки шприц-полуавтомат (микропипетку) трижды промывают физиологическим раствором и подсушивают фильтровальной бумагой.
    В каждую лунку рядом с сывороткой при помощи шприца-полуавтомата или микропипетки вносят 0,03 куб.см антигена. Затем антиген в каждой лунке тщательно смешивают с сывороткой ручным смесителем до получения однородной смеси, распределяя ее по всей поверхности лунки.
    Пластинку с сыворотками с антигеном покачивают в течение 4 мин. осторожными вращательными движениями вручную или при помощи аппарата для покачивания диагностических пластинок.
    3.1.3.Учет результатов реакции проводят визуально через 4 мин. после смешивания сыворотки крови с антигеном при слегка наклонном положении пластинки.
    Реакцию считают положительной при наличии отчетливо выраженной агглютинации окрашенных сапных бактерий антигена в виде мелких или крупных хлопьев при частичном или полном просветлении жидкости.
    Реакцию считают отрицательной при отсутствии четкой агглютинации.
    Агглютинацию, которая возникает позже 4 мин. не учитывают.
    3.1.4.После учета реакции пластинки и смеситель дезинфицируют погружением их на 5 мин. в 1%-ный раствор хлорамина, затем моют водопроводной водой. ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и используют повторно. Для проведения дезинфекции и сушки пластинок используют кассеты и штативы-сушилки.

    3.2. Реакция связывания комплемента.

    3.2.1. Компоненты реакции.
    3.2.1.1. Антиген сапной для РСК, изготавливается на биопредприятии.
    3.2.1.2. Испытуемая сыворотка крови лошадей, нативная или консервированная (по п.3.1.1.2.).
    3.2.1.3.Сыворотка сапная для РА и РСК (позитивная сыворотка), изготовляется на биопредприятии.
    3.2.1.4. Сыворотка крови лошадей неспецифическая не консервированная (негативная сыворотка), изготовляется на биопредприятии.
    3.2.1.5.Сыворотка гемолитическая для РСК, изготавливается на биопредприятии.
    3.2.1.6.Комплемент сухой для РСК, изготавливается на биопредприятии.
    3.2.1.7.Физиологический раствор (по п.3.1.1.5.).

    3.2.1.8.2,5%-ная взвесь эритроцитов барана в физиологическом растворе. Кровь у барана берут утром, до кормления, из яремной вены во флакон со стеклянными или металлическими бусами, встряхивают в течение 7-10 мин. и затем фильтруют через марлю. Эритроциты 3-4 раза отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500-3000 об./мин. до полного обесцвечивания промывной жидкости. Из осадка эритроцитов готовят 2.5%-ную взвесь в физиологическом растворе.
    3.2.2.Титрование гемолитической сыворотки (гемолизина).
    Титрование гемолизина проводят при использовании каждой новой серии и в дальнейшем ежегодно.
    Из основного разведения гемолизина 1:100 (0,1 куб.см гемолизина и 9,9 куб.см физиологического раствора) готовят последующие разведения.

    Схема разведения гемолизина.
    Основное разведение гемолизина
    1:100. куб.см Физиологический раствор.
    куб, см Полученное разведение гемолизина
    0,2 0,8 1:500
    0,1 0,9 1 :1000
    0,1 1,4 1:1500
    0,1 1,9 1:2000
    0,1 2,4 1: 2500
    0,1 2,9 1 :3000
    Затем по 0,2 куб.см каждого разведения переносят в ряд пробирок, в каждую пробирку добавляют по 0,2 куб.см комплемента в разведении 1:20, 0,2 куб см 2,5 %-ной взвеси эритроцитов и 0,4 куб.см физиологического раствора. Штатив с пробирками встряхивают и помещают в водяную баню на 10 мин. при температуре (37-38)гр.С.

    Титром гемолизина считают наибольшее его разведение, при котором наблюдается полный гемолиз эритроцитами.
    3.2.3.Приготовление гемолитической системы.

    Гемолитическую систему готовят смешиванием в равных объемах 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана в физиологическом растворе и раствора гемолитической сыворотки, взятой у удвоенном титре (например, пр титре гемолизина 1:1000 берут 2:1000, то есть для приготовления 10 куб.см гемолизина берут 0,2 куб.см гемолизина из ампулы и разводят в 99,8 куб см физиологического раствора). Полученные 100 куб.см раствора гемолизина приливают при постоянном помешивании к 100 куб.см взвеси эритроцитов. Гемолитическую систему помещают в водяную баню при температуре (37-38)гр.С на 20 мин. для сенсибилизации эритроцитов.
    3.2.4. титрование комплемента.
    Титрование комплемента проводят перед каждой постановкой реакции. Отбирают необходимое для данного объема исследований количество ампул (флаконов) с комплементом (из расчета 1 ампула или флакон на 100 пробирок реакции), растворяют препарат в физиологическом растворе, количество которого указано на ампуле (флаконе), сливают в одну емкость и перемешивают. Таким образом получают основной раствор комплемента, который хранят в холодильнике на протяжении постановки реакции. Из этого раствора готовят разведение 1:20 для титрования.
    Комплемент титруют в бактериолитической системе, для чего позитивную, негативную и 1-2 сыворотки из опыта разводят физиологическим раствором 1:10, инактивируют при температуре (60-62)гр.С в течение 30 мин. и разливают по 0,2 куб.см каждую в два ряда пробирок.
    Внесение остальных ингредиентов и условия титрования показаны в табл.1 на примере негативной сыворотки, при этом во вторые ряды сывороток вместо антигна вносят 0,2 куб.см физиологического раствора.
    При работе с аппаратом Флоринского для разведения комплемента берут дополнительный ряд пробирок, в которых делают те же разведения комплемента, но объем увеличивают в 10 раз, Затем разливателем Флоринского переносят по 0,2 куб.см разведенного комплемента во все пробирки каждого ряда и вносят остальные ингредиенты, как указано в табл.1.
    Титром комплемента в бактериолитической системе считают минимальное количество его, необходимое для полного гемолиза эритроцитов барана в пробирках с негативной сывороткой и сыворотками из опыта с антигеном и без антигена, а также в пробирках с сапной сывороткой без антигена при полной задержке гемолиза в пробирках с сапной сывороткой и антигеном.

    Таблица 1.
    Схема титрования комплемента в бактериолитической системе.
    Компоненты Номера пробирок (по первому ряду пробирок),
    1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
    Негативная сыворотка в разведении 1:10 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
    Антиген в рабочем разведении 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
    Комплемент 1:20 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12 0,14 0.16 0,18 0,20
    Физиологический раствор 0,18 0,16 0,14 0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0,00
    Водяная баня 20 минут при (37-38)гр.С
    Гемолитическая система 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4
    Водяная баня 20 минут при (37-38)гр.С
    Примерный результат, ЧГ ЧГ ЧГ ЧГ ПГ ПГ ПГ ПГ ПГ ПГ
    Дополнительный ряд пробирок для предварительного разведения комплемента

    Комплемент 1: 20 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0
    Физиологический расвор 1,8 1,6 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0
    3.2.5.Приготовление комплемента.

    Количество комплемента для главного опыта определяют по формуле:
    Т * ПХ = -------------. где:
    20
    Х - количество комплемента, необходимое для главного опыта;
    Т -титр комплемента в бактериолитической системе;
    П - количество пробирок в реакции;
    20 - кратность разведения комплемента при титровании.

    Например: в опыте 200 пробирок, титр комплемента (по табл.1) - 0,1. Следовательно, количество его для проведения опыта:

    0,1 * 200
    --------- = 1,0 куб.см.
    20
    Необходимое количество разведенного комплемента для главного опыта равно 40 куб.см (т.е. 0,2 куб. см * 200). Следовательно, к 0,1 куб.см основного раствора комплемента добавляют 39,0 куб.см физиологического раствора.
    3.3.Постановка главного опыта.
    Каждую сыворотку крови предварительно проинактивированную, как указано в п.3.2.4. исследуют в трех пробирках: без антигена в разведении 1:5 (контроль сыворотки) и с антигеном в разведении 1:5 и 1:10.
    Для этого в первую и третью пробирки разливают физиологический раствор в количестве 0,4 куб.см и 0,1 куб.см соответственно. Затем в первую вносят 01 куб.см испытуемой сыворотки, смешивают и переносят 0,2 куб.см во вторую и 0,1 куб.см - в третью пробирки.
    В опытные пробирки вносят по 0,2 куб.см сапного антигена в рабочем разведении в контрольные - по 0,2 куб.см комплемента в установленном титре. Штативы встряхивают и помещают в водяную баню на 20 мин. при температуре (37-38)гр.С.
    Затем во все пробирки вносят по 0,4 куб.см гемолитической системы, встряхивают и вновь помещают в водяную баню на 20 мин. при температуре (37-38)гр.С.
    Одновременно ставят следующие контроли:
    Позитивная и негативная сыворотки в тех же разведениях, что и испытуемые с антигеном и без антигена;
    антиген без сыворотки (на антикомплементарность);
    антиген без сыворотки и комплемента (на гомотоксичность);
    гемсистема с физраствором.
    При массовых исследованиях допускается постановка реакции в одной пробирке с разведением сыворотки 1:10 (0,02 куб.см сыворотки и 0,18 куб.см физиологического раствора). При работе с аппаратом Флоринского к 0,02 куб.см сыворотки добавляют 0,2 куб.см физиологического раствора. Сыворотки с задержкой гемолиза исследуют повторно, как указано выше.
    3.4. Учет результатов реакции проводят дважды: непосредственно после последнего прогревания пробирок в водяной бане и на следующие сутки после хранения пробирок при температуре (4-8)гр.С.
    Сначала учитываются результаты контролей. Если в пробирках с позитивной сывороткой и антигеном, с антигеном без сыворотки и комплемента, с гемолитической системой и физиологическим раствором будет полная задержка гемолиза, а в пробирках с негативной сывороткой и антигеном, с сапной и негативной сыворотками без антигена и с антигеном без сыворотки - полный гемолиз, постановку реакции считают правильной и проводят учет результатов.
    Реакцию учитывают по степени задержки гемолиза эритроцитов, которую определяют по шкале, приготовленной перед учетом реакции. Для этого содержимое трех-пяти пробирок с полным гемолизом сливают в одну, затем гемолизированную жидкость и физиологический раствор разливают в пробирки по следующей схеме:

    Схема
    Номера пробирок 1 2 3 4 5
    Гемолизированная жидкость (куб.см) 1,0 0,75 0,5 0,25 -
    Физиологический раствор (куб.см) - 0,25 0,5 0,75 1,0
    Процент гемолиза 100 75 50 25 0
    В соответствии с этой шкалой устанавливают степень задержки гемолиза эритроцитов в каждой пробирке:

    3.5.Реакцию оценивают в крестах в зависимости от процента гемолизированных эритроцитов:

    ++++ (4 креста)- полное отсутствие гемолиза;
    +++ (3 креста)- гемолиз 25% эритроцитов;
    ++ (2 креста)- гемолиз 50% эритроцитов;
    + (1 крест) - гемолиз 75% эритроцитов;
    - (минус) - полный гемолиз.

    3.6.Диагностическим титром сыворотки считают разведение ее 1:10. При задержке гемолиза эритроцитов в этом разведении сыворотки на ++++ и +++ реакцию считают положительной независимо от результатов реакции с сывороткой в разведении 1:5.
    При задержке на ++ и + реакцию считают сомнительной, если задержка гемолиза в разведении сыворотки 1:5 соответствует ++++ или +++.

    Во всех других случаях реакцию считают отрицательной.

    4.1. Болезнь протекает с образованием гранулем в легких, на слизистой оболочке носовой полости, гортани, трахеи, на коже, в других органах и тканях с поражением лимфатических узлов. Гранулемы могут подвергаться распаду с образованием рубцующихся язв.
    4.2. При исследовании вначале осматривают кожный покров животного, разрезают обнаруженные узлы. Затем труп вскрывают без снятия кожи, осматривают слизистые оболочки органов дыхания, обследуют легкие, печень, селезенку, лимфатические узлы головы и других органов.
    4.2.1. На слизистых оболочках обнаруживаются узелки, язвы с красным ободком или рубцы, в паренхиматозных органах - светло-серые узелки разной величины, при этом часто изменения наблюдают одновременно и в регионарных лимфатических узлах.
    4.2.2.Поражения легких могут быть в виде милиарных узелков, а также в форме мелких и крупных очагов ( ацинозная, ацинозно-надозная лобулярная или лобарная пневмания), иногда с кавернами. Обнаруживается также саловидные участки склероза ткани.
    Пораженные лимфатические узлы резко увеличены, плотны, могут содержать обызвествленные инкапсулированные узелки, или быть на разрезе однородными, без рисунка, серо-белого цвета. Нередко наблюдается воспаление окружающей узел клетчатки (периаденит) с образованием общего плотного фиброзного узла.

    5.1. бактериологическая диагностика включает культуральное и биологическое исследования биоматериала. Для исследования используют подчелюстные, заглоточные, бронхиальные, средостенные лимфатические узлы носовую перегородку, гортань,глотку, трахею, а также измененные участки легкого, печени, селезенки, кожи с подкожной клетчаткой.

    5.2. Культуральное исследование.

    Из биоматериала делают высев с помощью пастеровской пипетки с грушей или шприца с длинной тонкой иглой (отдельного для каждого органа) в МБП и на МПА с 2-4% глицерина (МПГБ, МПГА), рН 6,8-7,0.
    Посевы инкубируют при температуре (37-38)гр.С. Рост обычно появляется на 2-4 сут.
    При росте возбудителя бульон мутнеет, на дне появляется слизистый серо-белый осадок, поднимающийся штопором при встряхивании пробирки; некоторые штаммы образуют пристеночное кольцо или пленку на поверхности бульона.
    На агаре возбудитель сапа растет в виде гладких полупрозрачных колоний серовато-белого цвета с перламутровым оттенком, сливающихся затем в слизистой налет на поверхности среды.
    Для идентификации возбудителя выделенную культуру микроскопируют, мазки окрашивают по Граму, синькой Леффлера (старой) или по Романовскому-Гимза, пересевают на картофельную среду Павловского, обезжиренное молоко, определяют подвижность в висячей капле, а также исследуют в реакции агглютинации на стеле с сапной сывороткой, взятой в разведении 1:10.
    Возбудитель сапа представляет собой тонкие зернистые грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные одиночно или короткими цепочками. При окраске по Романовскому-Гимза и синькой Леффлера отмечают хорошо выраженную зернистость.
    При выращивании на картофельной среде Павловского через 2-3 сут. Появляются мелкие полупрозрачные с желтоватым оттенком колонии, которые затем сливаются, образуя слизистый "медовый" налет. Цвет налета меняется от янтарно-желтого в первые 3 сут. Роста до буро-коричневого и красноватого к 6-8 сут.
    Возбудитель сапа медленно (на 8-14 сут.) свертывает молоко, неподвижен. Следует отметить значительное выраженное броуновское движение клеток возбудителя в висячей капле.
    Большинство штаммов агглютинируется сапной сывороткой.
    Выделенную культуру исследуют на биологические свойства (по п.5.3.).

    Из отобранных участков биоматериала (п.5.1.) одновременно с посевом готовят суспензию путем растирания тканей с физиологическим раствором в ступке с соблюдением условий стерильности и вводят подкожно в области шеи трем хомячкам-самцам в дозе 1 куб.см, или трем морским свинкам-самцам в дозе 3 куб.см.

    Выделенную из биоматериала культуру (п.5.2.) вводят двум хомячкам или двум свинкам в тех же дозах.
    Срок наблюдения за зараженными хомячками - 12 суток, морскими свинками - 25 суток.
    При наличии в биоматериале возбудителя сапа в месте подкожного введения через 3-4 суток образуется язва с уплотненными краями. Больные животные малоподвижны, у них развивается ринит, конъюнктивит, орхит.
    Гибель хомячков при достаточной дозе и вирулентности возбудителя наступвет через 5-7 сут. морских свинок - через 8-17 суток. У морских свинок заболевание может перейти в хроническую форму.
    Животных с клиническими признаками болезни усыпляют эфиром, вскрывают и проводят высев из сердца, селезенки, печени, семенников на питательные среды, затем исследуют выделенную культуру, как указано в п. 5.2. Аналогично поступают с павшими зараженными животными в легких, семенниках обнаруживают геморрагические и некротические узелки.

    Для гистологического исследования берут измененные кусочки органов и тканей, из которых после фиксации готовят срезы на замораживающем микротоме или после заливки целлоидином (парафином).
    Срезы окрашивают гематоксилин-эозином и просматривают сначала при малом увеличении (окуляр х 7, объектив х 10), затем при обнаружении узелков рассматривают их при большом увеличении (объектив х 40 - х 60).
    Типичной формой сапного изменения является инфекционная грнулема (узелок) специфического строения. В центре развивающегося узелка обнаруживают нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты и эпителиоидные клетки. Дифференцирующим признаком является карипрексис (распад ядер) лейкоцитов.
    В стадии инкапсуляции центр узелка представлен глыбчато-зернистым распадом хроматина ядер лейкоцитов и окрашен в темно-синий цвет. Внутренний слой клеточной зоны состоит из эпителиоидных клеток с фибробластами и коллагеновыми волокнами.
    Центральная часть обызвествленных узелков окрашена в темно-синий, а некротическая масса - в розовый цвет, Известь выступает в виде глыбок и зерен на общем розовом фоне необызвествленной некротической массы. За соединительтканный капсулой располагаются лимфоидные клетки в виде синеватого ободка.
    Помимо узелков, сапные изменения могут проявляться в виде диффузного вопаления с экссудативным и продуктивным акцентом, которое характеризуется наличием очагов лейкоцитарных скоплений с явлениями кариорексиса, или пролиферацией лимфоидных и эпителиоидных клеток.
    Изменения слизистой носовой полости могут представлять собой комбинацию узелков, первичных и вторичных язв и рубцов.

    7. Постановка диагноза.

    7.1.При положительном результате хотя бы одного из следующих методов исследования: клинического осмотра, глазной маллеиновой пробы, исследования сыворотки крови в РА или РСК животных считают подозреваемыми в заболевании сапа.

    7.2. Диагноз на сап считают установленным в следующих случаях:

    7.2.1. Положительная маллеиновая проба, подтвержденная результатом патологоанатомического исследования.

    7.2.2. Обнаружение характерных для сапа изменений во внутренних органах и тканях.

    7.2.3. выделение культуры из патологического материала со свойствами, характерными для возбудителя сапа.

    7.2.4. Получение положительных результатов биологического исследования, даже если культуры возбудителя из исходного материала не выделены.

    С изданием настоящего наставления на территории Российской Федерации не действуют "Методические указания по лабораторной диагностике сапа", утвержденные ГУВ Минсельхоза СССР 24 июля 1985г. "Наставление по постановке пластинчатой реакции агглютинации с сапным цветным антигеном", утвержденное ГУВ Минсельхоза СССР 19 октября 1990г. "Наставление по применению маллеина для диагностики сапа", утвержденное департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 28 апреля 1995года.